PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
萘-1,4,5,8-四羧酸二酐(>95.0%(HPLC)(T))三酯

炔基三(>98.0%(HPLC)(N))-2,二氟

1,4,5,8-萘四甲?；?>97.0%(N))2-肟酸酯

3,4,9,10－苝四甲酰二亞(>95.0%(N))2,6-二煙酸

硒吩(>98.0%(GC))2,6-二氟甲酸

9,9'-螺二[9H-芴]-2-酸(>95.0%(T))氟-2-酚

三(溴基)(>98.0%(GC))2-氟-6-甲酸

2,2',7,7'-四溴-9,9'-螺二[9H-芴](>98.0%(T))2--6-甲氧基-硝基吡啶

1,3,6,8-四溴芘(>98.0%(T))2,二氟溴

2,2',7,7'-四溴-9,9-聯(lián)亞芴基(>98.0%(HPLC))1,環(huán)戊二酮

雙(8-羥基喹啉)鋅(II)水合物(>93.0%(T))2,3,三氟

雙[2-(2-并噻唑基)酚]鋅(Ⅱ)(>98.0%(T))3,二氟

雙[2-(2-并惡唑基)酚]鋅(II)(>95.0%(T))6-三氟甲基吡啶-

酞菁銅(II)(α-型)(>90.0%(T))喹啉-8-甲

酞菁銅(II)(β-型)(>90.0%(T))氟吲哚

(1,10-菲咯啉)三[4,4,三氟-1-(2-噻吩基)-1,丁二酮]銪(III)(>98.0%(T))7-氟吲哚

三(8-羥基喹啉)鋁(>98.0%(T))2-甲基-溴吡啶

化三(2,2'-聯(lián)吡啶)釕(II)六水合物(>98.0%(T))溴-2-
人鼻病毒9探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒腦蛋白44抗體CD122/IL-2RB/FITC  熒光素標(biāo)記CD122/白介素2受體β鏈抗體IgG20 ul

腦蛋白44樣蛋白抗體IL-3/FITC (mouse, rat)  熒光素標(biāo)記白介素3抗體IgG100 ul

嗜脂蛋白樣2抗體IL-3R Alpha/CD123/FITC  熒光素標(biāo)記白介素3受體a鏈抗體IgG100 ul

嗜脂蛋白樣8抗體IKI3 family proin/FITC  熒光素標(biāo)記擬南芥IKI3抗體IgG100 ul

嗜脂蛋白樣9抗體IKK gamma/FITC  熒光素標(biāo)記核因子κB激酶gamma抑制劑抗體IgG20 ul

BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體IKK alpha/FITC  熒光素標(biāo)記核因子κB激酶alpha抑制劑抗體IgG100 ul

腦特異性血管生成抑制蛋白1抗體IKK beta /FITC  熒光素標(biāo)記核因子κB激酶beta抑制劑抗體IgG100 ul

Bcl2相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體phospho-IKK gamma (Ser85) /FITC  熒光素標(biāo)記酸化核因子κB激酶gamma抑制劑抗體IgG100 ul

腦環(huán)核苷酸門控通道蛋白1抗體phospho-IKK gamma (Ser31) /FITC  熒光素標(biāo)記酸化核因子κB激酶gamma抑制劑抗體IgG100 ul