熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
1）紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
三氟酰酮(>98.0%(GC))2-溴-5-氟三氟甲

9H,9H-三十氟-8,10-十七烷二酮(>98.0%(GC))間溴三氟甲

9-溴菲(>98.0%(GC))3,5-雙三氟甲

溴菲(>98.0%(GC))3,5-二硝基三氟甲

3,6-二甲基菲(>95.0%(GC))反式-羥基-L-脯氨酸甲酯鹽酸鹽

甲基菲(>98.0%(GC))間二三氟甲

9-菲酸 (含有數(shù)量不等的酸酐)環(huán)酰

溴-1,10-鄰二氮雜菲(>98.0%(HPLC)(T))對(duì)溴三氟甲

5--1,10-菲咯啉(>98.0%(T))氟三氟甲

2--1,10-鄰二氮雜菲(>98.0%(HPLC)(T))對(duì)三氟酚

4,7-二甲基-1,10-鄰二氮雜菲(>98.0%(T))氟磺酰

5,6-二甲基-1,10-菲咯啉(>98.0%(T))1-溴-三氟對(duì)二甲

2,9-二丁基-1,10-鄰二氮雜菲(>96.0%(HPLC))磺?；姿?/span>

2,9-二基-1,10-菲咯啉(>98.0%(HPLC)(T))間氟

2,9-二-1,10-菲羅啉(>97.0%(GC)(T))2-氟-酚

3,4,7,8-四甲基-1,10-菲羅啉(>98.0%(HPLC)(T))氟-甲酸

2-(rt-丁基)嘧啶(>97.0%(GC))2-溴-4'-氟酮

甲基-2-基吡啶(>98.0%(GC))對(duì)氟甲酸甲酯
眼蜱通用探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒血型Lewis A抗原抗體IL-12/FITC   熒光素標(biāo)記白介素12抗體IgG100 ul

粘蛋白/巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶3抗體IL-12/FITC  熒光素標(biāo)記抗白介素12抗體()IgG400 ul

Bloom綜合征相關(guān)蛋白抗體IL-12R Beta1/CD212/FITC  熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-12受體β1抗體IgG100 ul

骨形態(tài)發(fā)生蛋白8b抗體IL-12R Beta2/FITC  熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-12受體β2抗體IgG100 ul

酸化非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體IL-13/FITC   熒光素標(biāo)記白介素13抗體IgG100 ul

酸化促凋亡調(diào)節(jié)蛋白BNIP3抗體IL-13Ra1/FITC  熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-13受體a1抗體IgG100 ul

B淋巴細(xì)胞特異性激活OCT結(jié)合蛋白1抗體IL-13Ra2/FITC  熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-13受體a2抗體IgG100 ul

核糖體合成蛋白BOP1抗體IL-14/Taxilin alpha/FITC  熒光素標(biāo)記抗白介素14抗體IgG20 ul

調(diào)節(jié)中心體分離早期相關(guān)激酶BORA抗體IL-15/FITC  熒光素標(biāo)記白介素15抗體IgG100 ul