PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩?lái)說(shuō)，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題，反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
雙(2-羥基-5-)硫(>98.0%(GC)(T))-8-甲氧基喹啉

甲酰-4'-甲基二硫(>98.0%(GC))-8-甲氧基喹啉-甲酸酯

雙(羥基-甲基)硫(>98.0%(GC))-8-羥基喹啉

雙(甲基酰基硫代基)硫(>97.0%(HPLC))8-溴-喹啉

叔丁基二硫(>98.0%(GC))靛紅酸酐

雙(基)硫(>99.0%(GC))4,8-二喹啉

雙(羥基)硫(>98.0%(GC))4,8-二羥基喹啉

5,5'-硫代雙水楊酸(>98.0%(GC)(T))4,8-二溴喹啉

2,2'-硫代二(4,6-二酚)(>97.0%(GC)(T))氨基-吡啶

4,4'-硫代雙硫酚(>98.0%(GC))氨基-戊-2-酮

雙(氨基基)砜(>98.0%(T))1-酰哌啶-

4,4'-二二砜(>98.0%(GC))芐氧基酚

雙[3,5-二溴-(2-羥氧基)基]砜(>96.0%(GC))甲基-1,2,噻二唑-5-羧酸

雙(羥基-3,5-二甲基)砜(>98.0%(HPLC)(T))甲基-1，2，噻重氮-5-羧酸酯

雙[(2-羥氧基)基]砜(>97.0%(GC))甲基-1,2,噻重氮-5-甲酰

雙[(氨基氧基)基]砜(>98.0%(HPLC)(T))甲基-1,2,噻二唑-5-羧酸酰肼

雙[(氨基氧基)基]砜(>98.0%(HPLC)(T))甲氧基喹啉

雙(氟-基)亞砜(>98.0%(GC))甲氧基異喹啉
溶酪巨球菌探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒肉毒棕櫚?；D(zhuǎn)移酶1A抗體HSA/FITC  熒光素標(biāo)記鼠抗血清白蛋白抗體IgG100 ul

細(xì)胞分化周期CDC42蛋白抗體HAS/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗血清白蛋白抗體IgG100 ul

酸化細(xì)胞分化周期CDC42蛋白抗體HSA/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鼠抗血清白蛋白單克隆抗體IgG100 ul

環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗體Mouse YERSINIA PESTIS Monoclonal body /FITC  熒光素標(biāo)記鼠抗鼠疫F1蛋白/鼠疫耶爾森氏菌莢膜抗原F1單克隆抗體IgG100 ul

階段特異性胚胎表面抗原-1抗體Mouse IgA/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗IgA抗體20 ul

20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框202抗體MPO /FITC  熒光素標(biāo)記髓過(guò)氧化物酶抗體IgG100 ul

粘膜相關(guān)上皮趨化因子28抗體HAVCR1/KIM1/TIM1/FITC  熒光素標(biāo)記甲型肝炎病毒細(xì)胞受體1IgG100 ul

癌胚抗原單克隆抗體（包被）HSD11B2/HSD2 /FITC  熒光素標(biāo)記羥基類固醇脫氫酶11β2抗體IgG20 ul

癌胚抗原單克隆抗體（檢測(cè)）MR/FITC  熒光素標(biāo)記鹽皮質(zhì)激素受體抗體IgG100 ul