PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩?lái)說(shuō)，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為T(mén)aqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題，反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
(2,4,6-*?；?二基氧化膦(>98.0%(HPLC))1,4,7,10-四叔丁基二萘嵌

2-基蒽醌(>98.0%(GC))4,4'-雙[(二對(duì)甲基氨基)基]聯(lián)

1-羥環(huán)己基酮(>98.0%(GC))DPAVB

2-羥基-2-酮(>96.0%(GC))(OC-6-33)-雙[3,5-二氟-2-(2-吡啶基-KN)基-KC][四(1H-吡唑基-KN1)酸(1-)-KN2,KN2']-銥

2-羥基-4'-(2-羥氧基)-2-酮(>98.0%(HPLC))二并噻吩-酸

2-甲基-4'-(甲基硫代)-2-嗎啉基酮(>98.0%(GC)(T))8-羥基喹啉鋁

2-異亞酮(>98.0%(GC))9,10-二(2-萘基)蒽

2-基-2-(對(duì)甲磺酰氧基)酮(>97.0%(HPLC))4,4',4''-三(1-芘基)三

雙(叔丁基)鎓六氟酸鹽(>98.0%(HPLC)(T))9-(2-萘基)-10-[(1-萘基)基]蒽

雙(叔丁基)鎓三氟甲磺酸鹽(>98.0%(HPLC)(T))N,N'-二基-N,N'-(1-萘基)-1,1'-聯(lián)-4,4'-二

環(huán)基二基锍四氟酸鹽(>90.0%(T))N2,N7-二-1-萘基-N2,N7-二基-9,9'-螺二[9H-芴]-2,7-二

二基鎓六氟酸鹽(>97.0%(T))4,4'-環(huán)己基二[N,N-二(基)]

二基鎓六氟鹽(>98.0%(T))MEO-TPD

二基嗡三氟磺酸鹽(>98.0%(T))4,4',4''-三(N-基-N-基氨基)三

2-(3,二甲氧基基)-4,6-雙(*基)-1,3,5-三(>98.0%(HPLC)(N))N,N-基-N,N-(9-基-咔唑基)-1,1'-聯(lián)-4,4'-二

2-[2-(呋喃-2-基)基]-4,6-雙(*基)-1,3,5-三(>95.0%(HPLC)(N))2,3,5,6-四氟-7,7',8,8'-四二甲基對(duì)醌

異基-4'-甲基二基鎓四(五氟基)酸鹽(>98.0%(T))8-羥基喹啉-鋰

2-[2-(5-甲基呋喃-2-基)基]-4,6-雙(*基)-1,3,5-三1,3,5-三(1-基-1H-并咪唑-2-基)
反芻獸曼氏桿菌探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框48抗體Nestin/FITC  熒光素標(biāo)記巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體IgG20 ul

19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框50抗體Nesfatin-1/Nucb2/FITC  熒光素標(biāo)記新的飽食分子蛋白抗體IgG100 ul

19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框51抗體Nestin/FITC  熒光素標(biāo)記巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體IgG20 ul

19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框52抗體Nestin/RBITC  紅色熒光素羅丹明(RBITC)標(biāo)記巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體IgG1 Kit

19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框55抗體Nestin/RBITC  紅色熒光素羅丹明(RBITC)標(biāo)記巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體IgG100 ul

19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框56抗體NeuN/FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)元核抗原抗體IgG100 ul

19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框57抗體Neurobeachin proin /FITC  熒光素標(biāo)記蛋白激酶錨定蛋白/激酶固定蛋白抗體IgG20 ul

19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框61抗體Neurocan/FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)粘蛋白抗體IgG100 ul

19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框77抗體Neuro D/FITC  熒光素標(biāo)記抗神經(jīng)源分化因子抗體IgG100 ul