特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩碚f，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。
?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時，引物與該探針同時結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實(shí)驗(yàn)時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計，熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強(qiáng)度信號，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
水楊酸-辛基酯(>95.0%(GC))2-氟-6-酚

水楊酸對甲酯(>95.0%(GC))3,二氟甲酸

水楊酸酯(>98.0%(T))酸二芐酯

水楊酸-叔丁基酯(>98.0%(GC))芐基溴

對二甲酸雙[(甲氧羰基)基]酯(>97.0%(HPLC))2-氨基-5-溴-噻唑鹽

N-(甲氧基-2-羥基亞甲基)-丁基(>98.0%(HPLC)(T))2,5-二溴對二甲酸

4'-丁氧基亞甲基-基(>98.0%(T))2-氨基-4,5-二氟甲酸

4'-(戊氧基)亞甲基-基(>96.0%(HPLC)(T))2-丁基-(羥基甲酰基)-5-并呋喃

[(甲氧基亞甲基)氨基]肉桂酸丁酯(>98.0%(T))2-丁基-(甲氧基甲?；?-5-并呋喃

亞甲基-2-萘(>98.0%(N))2-丁基-5-并呋喃

對二甲酸雙(對氨基)(>98.0%(GC)(N))維拉唑酮中間體(代丁基)-5-基吲哚

對二甲酸雙(氟代)(>98.0%(N))N-Boc-順式-羥基-L-脯氨酸

丁氧基亞甲基-4'-戊基(>98.0%(T))2-叔丁氧基羰氨甲酸

4'-亞甲基-丁氧R-1-1H-芐氧基吡咯烷鹽酸鹽

4'-亞甲基-氧(>98.0%(T))(S)-5-溴甲基-2-吡咯烷酮

4'-氧基亞甲基-氨基甲(>98.0%(GC)(N))(1S,2S)-(+)-N,N'-二甲基-1,2-環(huán)己二

4'-氧基亞甲基-丁基(>99.0%(T))福多斯坦

4'-己氧基亞甲基-基(>98.0%(T))1-金剛烷基二酸
錦鯉皰疹病毒基因探針法熒光PCR檢測試劑盒1號染色體開放閱讀框125抗體L-enk/FITC  熒光素標(biāo)記抗亮氨酸腦啡肽抗體IgG100 ul

1號染色體開放閱讀框129抗體 Beta-lactoglobulin/FITC  熒光素標(biāo)記牛β-球蛋白抗體IgG20 ul

1號染色體開放閱讀框159抗體 Beta-lactoglobulin/FITC  熒光素標(biāo)記牛β-球蛋白抗體IgG100 ul

1號染色體開放閱讀框163抗體 Beta-lactoglobulin/FITC  熒光素標(biāo)記牛β-球蛋白抗體IgG100 ul

1號染色體開放閱讀框172抗體Laminin alpha5/FITC  熒光素標(biāo)記層粘蛋白α5抗體IgG100 ul

1號染色體開放閱讀框2抗體LAG-3/CD223/FITC  熒光素標(biāo)記淋巴細(xì)胞活化基因-3抗體IgG100µl

1號染色體開放閱讀框19抗體lamin A/FITC  熒光素標(biāo)記核纖層蛋白A抗體IgG500 ul

1號染色體開放閱讀框25抗體Laminin Beta1/FITC  熒光素標(biāo)記層粘連蛋白β1抗體IgG100 ul

1號染色體開放閱讀框31抗體lamin B/FITC  熒光素標(biāo)記核纖層蛋白B抗體IgG100 ul