客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR試劑盒技術：
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
原鈣黏素9(PCDH9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　97%　香菇　5g

原鈣黏素8(PCDH8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　99%　球形賴氨酸芽孢桿菌　100g

原鈣黏素7(PCDH7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　99%　豬丹毒絲菌　25g

肝配蛋白A2(EFNA2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　97%　多主枝孢　25g

肝配蛋白A5(EFNA5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　97%　釀酒酵母　5g

肝配蛋白B3(EFNB3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　97%　黃硬皮馬勃　1g

肝配蛋白B1(EFNB1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　97%　球孢白僵菌　5g

γ-谷氨?；D氨酶7(γGT7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　>97%(HPLC)　大豆慢生根瘤菌　1g

γ-谷氨酰基轉氨酶6(γGT6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　>97%(HPLC)　酸單胞菌　250mg

γ-谷氨?；D氨酶2(γGT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　97%　鏈格孢　1g

脂質(zhì)運載蛋白10(LCN10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　97%　木糖駒形氏桿菌　25g

脂質(zhì)運載蛋白9(LCN9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　97%　芽孢桿菌屬　5g

脂質(zhì)運載蛋白8(LCN8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%　細鏈格孢　100g

脂質(zhì)運載蛋白6(LCN6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%　野油菜黃單胞菌　25g

母系蛋白4(MATN4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%　擬青霉　500g

母系蛋白3(MATN3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　97%　產(chǎn)色鏈霉菌　5ml

母系蛋白2(MATN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　99%　淡紫擬青霉　1g

母系蛋白1(MATN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　99%　變天藍鏈霉菌　25g
馬疥螨探針法熒光PCR檢測試劑盒內(nèi)皮素3抗體STAT5(signal transducers and activators of transduction5)  信號轉導和轉錄激活因子5(STAT5)抗原100 ul

酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶5抗體STAT6(signal transducers and activators of transduction 6)  信號轉導和轉錄激活因子6抗原20 ul

酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶5抗體SUMO(small ubiquitin-relad modifier)  類泛素蛋白抗原100 ul

細胞外信號調(diào)節(jié)激酶4抗體Gamma-Synuclein/SNCG  核突觸蛋白-γ抗原100 ul

腸出血性大腸桿菌埃希氏菌O157:H7抗體phospho-Tau proin (pThr489) peptide  酸化微管相關蛋白100 ul

酸化絲裂原活化蛋白激酶ERK抗體MAP-2(microtubule associad proin 2)  微管相關蛋白2抗原10 mg

CD312抗體MAP1A/Mtap1a(microtubule associad proin 1A)  微管相關蛋白1A抗原100 ul

eIF4E結合蛋白抗體TBX2/T-box2(T-box Proin 2)  新型抑癌基因(多肽)20 ul

酸化表皮生長因子受體抗體TCF7L2(transcription factor 7-like 2)  轉錄因子7類似物2抗原100 ul
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。