熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開(kāi)了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過(guò)將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過(guò)側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。 產(chǎn)品名稱 | 尖孢鐮刀菌探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Fusarium oxysporum | 貨號(hào) | YSP96739 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
1）紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
京尼平RBPSUH Antibody2-四氫糠 桔梗皂苷D(標(biāo)準(zhǔn)品)Ikaros Antibody2-乙氧基-氟酸 菊苣酸（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-SHIP2 (Tyr1135) (D33C6) XP® Rabbit mAb2,4,6-三羥基乙酮 具棲冬青苷(標(biāo)準(zhǔn)品)EpCAM (VU1D9) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2,2-二甲基-羥基酸 （標(biāo)準(zhǔn)品）Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-羥并咪唑 莰（標(biāo)準(zhǔn)品）Thymidyla Synthase (D26G11) Rabbit mAb2-氯并咪唑 科羅索酸（標(biāo)準(zhǔn)品）NBR1 (D2E6) Rabbit mAb (PE Conjuga)辛可尼丁 可可（標(biāo)準(zhǔn)品）PEN2 Antibody刺芒柄花素 苦參(標(biāo)準(zhǔn)品)Pim-1 (D8D7Y) Rabbit mAb9-芴酮 苦參Human <sub>His6</sub>Fas Ligand/TNFSF6 (h<sub>His6</sub>FasL)(三氟甲基)-5,6,7,8-四氫-[1,2,4]三唑并[4,a]吡鹽酸鹽 D-(-)-奎寧酸（標(biāo)準(zhǔn)品）Human <sub>His6</sub>Fas Ligand/TNFSF6 (h<sub>His6</sub>FasL)大豆素 辣椒,辣椒素（天然提取標(biāo)準(zhǔn)品）TNFRSF8/CD30 (E4L4I) XP® Rabbit mAb異喹啉羧酸 辣椒,辣椒素(天然提取)TNFRSF8/CD30 (E4L4I) XP® Rabbit mAb喹啉-羧酸 辣椒,辣椒素(合成)Mcl-1 (D35A5) Rabbit mAb巰基甲酸 萊苞迪甙C（標(biāo)準(zhǔn)品）Mcl-1 (D35A5) Rabbit mAb2,4,6-* 萊苞迪甙D（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-HNF1α (Ser247) Antibody溴丁酸甲酯 老鸛草素（標(biāo)準(zhǔn)品）Fascin (55k-2) Mouse mAb2,5-二羥基乙酮 酪(標(biāo)準(zhǔn)品)NKX6.1 (D8O4R) Rabbit mAb羥基喹唑啉
尖孢鐮刀菌探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒腺苷脫氨酶抗體VE-cadherin/CD144/VECD/FITC 熒光素標(biāo)記上皮型鈣粘附分子/血管內(nèi)皮鈣粘蛋白抗體IgG100 ul 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族4抗體CD146(MCAN)/FITC 熒光素標(biāo)記抗黑色素瘤細(xì)胞粘付分子CD146抗體IgG100 ul ATRNL1蛋白抗體CD158a/KIR2DL1/FITC 熒光素標(biāo)記NK細(xì)胞抑制性受體2DL1抗體IgG20 ul AFP4a蛋白抗體CD158b2/KIR2DL3/NKAT2a/FITC 熒光素標(biāo)記NK細(xì)胞抑制性受體2DL3抗體IgG100 ul 鐵蛋白Fe65樣蛋白1抗體CD158D/KIR2DL4/G9P/FITC 熒光素標(biāo)記NK細(xì)胞抑制性受體2DL4抗體IgG100µl 鐵蛋白Fe65樣蛋白2抗體CD158e/KIR3DL1/FITC 熒光素標(biāo)記NK細(xì)胞抑制性受體3DL1抗體IgG100 ul β淀粉樣蛋白前體蛋白結(jié)合蛋白2抗體CD158e/KIR3DL1/FITC 熒光素標(biāo)記NK細(xì)胞抑制性受體3DL1抗體IgG100 ul 早老素穩(wěn)定因子樣蛋白/γ分泌酶組件蛋白APH1抗體CD158i/KIR2DS4/FITC 熒光素標(biāo)記NK細(xì)胞抑制性受體2DS4抗體IgG20 ul 酸化蛋白激酶AKT1抗體CD147/EMMPRIN/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子抗體IgG100 ul |
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