適用
Abraxis氟喹諾酮檢測(cè)試劑盒適用于檢測(cè)食物產(chǎn)品中氟喹諾酮的含量。
原理
Abraxis 氟喹諾酮檢測(cè)試劑盒的原理是競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫反應(yīng)。利用提取液通過(guò)震蕩萃取從樣品中提取氟喹諾
酮。然后經(jīng)稀釋、過(guò)濾、待測(cè)。在固相載體微孔板中加入氟喹諾酮-HRP 酶結(jié)合物，然后加入標(biāo)準(zhǔn)和處理的
樣品，然后再加入氟喹諾酮抗體引發(fā)反應(yīng)。孵育10 分，樣品中的氟喹諾酮和酶標(biāo)氟喹諾酮競(jìng)爭(zhēng)于氟喹諾
酮抗體反應(yīng)，氟喹諾酮抗體和微孔結(jié)合。洗板除去沒(méi)有反應(yīng)的試劑。加入底物顯色劑、無(wú)色的顯色劑轉(zhuǎn)化
為藍(lán)色的產(chǎn)物；孵育30 分鐘后加入反應(yīng)終止液終止反應(yīng)，顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色；在450nm波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，
樣品中的氟喹諾酮濃度與吸收光強(qiáng)度成反比。
特異性
Abraxis氟喹諾酮檢測(cè)試劑盒不能區(qū)分不同種類(lèi)的氟喹諾酮，檢測(cè)不同的氟喹諾酮交叉率也不同。以下是試
劑盒對(duì)不同的氟喹諾酮的交叉反應(yīng)列表。
檢測(cè)限
肉、魚(yú)蝦: 1 ppb
蜂蜜: 2 ppb
試劑盒組成
試劑盒保存在2-8攝氏度。在有效期內(nèi)都可以使用
1、96孔酶標(biāo)板：1塊（12×8條）。
2、氟喹諾酮標(biāo)準(zhǔn)品貯備液（Standard）: 6瓶（1ml/瓶），濃度分別為0, 0.2, 0.8, 3.2 6.4 和16 μg/L （ppb）
3、氟喹諾酮HRP酶標(biāo)記物：1瓶（6ml）
4、兔抗氟喹諾酮抗體：1瓶（6ml）
5、5X 濃縮洗液：1瓶（100ml）
6、底物顯色液：1瓶（12ml）
7、終止液：1瓶（12ml 、1N HCl）。
8、使用說(shuō)明書(shū)
注意事項(xiàng)
1．配套使用所提供的試劑，不要同其它公司的產(chǎn)品混用，不要將不同批次的產(chǎn)品混用。
2．樣品稀釋或含有雜質(zhì)很可能對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確性有影響。
3．不要使用過(guò)期的產(chǎn)品。
4．使用之前將所有試劑回升至室溫20-28ºC.不要在室溫放置超過(guò)24 小時(shí)。
5. 氟喹諾酮是抗生素，小心對(duì)待。
6. 停止液是1N 鹽酸，避免接觸皮膚。如果接觸請(qǐng)用大量的水沖洗。
7. 洗液是5X濃縮的，在使用時(shí)要用無(wú)離子水稀釋?zhuān)ㄈ?00ml洗液加400ml無(wú)離子水），用稀釋后的溶
液洗板
試劑盒未提供的材料
1、蒸餾水或無(wú)離子水
2、量筒100ml
3、燒杯（樣品提取和收集）
4、離心機(jī)
5、移液器50 μL
6、50 and 100 μL 8 道移液器
7、吸水紙
8、450nm 酶標(biāo)儀
9、計(jì)時(shí)器
10. 攪拌器
11. SPE C18 Column 200mg/3mL
12. 乙腈
13. 乙腈
14. 洗瓶
15. 乙腈
16. HCl
17. 乙腈
18. 10 mM PBS, [0.31 g NaH2PO4-2H2O+ 2.87 g Na2HPO4-12H2O + 9 g NaCl,加無(wú)離子水定容到一升。
樣品處理
肉樣
1.勻漿化樣品。
2.在50ml的離心管中加入5克勻漿化的樣品，再加入10 ml乙腈
3.劇烈震蕩5分鐘
4.室溫3000轉(zhuǎn)離心5分鐘
5.取2ml上清液到一個(gè)干凈的玻璃試管中，用氮?dú)獯蹈伞?br />6.然后加入2ml己烷，劇烈震蕩1分鐘，再加入2 mL10 mM PBS混勻。
7．室溫3000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
8.移除上層液體。
9.把下層液體轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的管中，待測(cè)。
蜂蜜樣品（1：2 稀釋?zhuān)?br />1.在一個(gè)15ml 的帶螺旋蓋的玻璃瓶中加入1g 蜂蜜。
2.加入5 ml 1 M HCl 劇烈震蕩混勻。
3.室溫3000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
4.用6ml 甲醇和6ml水前處理C18 柱。
5.把第三步驟的清澈的樣品萃取液過(guò)柱（flow rate: 15 drops/min）。
6.用3 ml 水和3 ml 5% 甲醇/水溶液洗柱。
7.用弱的氮?dú)饬鞔? min清除殘留的水樣。
8.用5%的乙酸/甲醇溶液洗脫（flow rate: 15 drops/min）
9.用氮?dú)獯蹈上疵撘骸?br />10.用2 ml 10 mM PBS 溶解干燥的萃取物，劇烈混勻。
11.待測(cè)，檢測(cè)結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)2。
操作步驟
注意：標(biāo)準(zhǔn)和樣品做平行可以增加精密度和準(zhǔn)確度
1、使用前將試劑盒和樣品處理物提前從冰箱中拿出來(lái)使其達(dá)到室溫。
2、從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。
3、在對(duì)應(yīng)的微孔中加入50μL 1：10 稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)和樣品，確保吸頭要干凈。
4、每個(gè)測(cè)試孔都加入50 μL酶結(jié)合物
5、每個(gè)測(cè)試孔都加入50 μL抗體溶液
6、孵育30分鐘
7、孵育完成后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用1X 洗液加滿微孔然后倒掉，重復(fù)三次，總共四次洗板。
8、在zui后一次洗板后拍板，去掉殘留的洗液。
9、每個(gè)測(cè)試孔加入100μL底物。
10、孵育30分鐘
10、每個(gè)測(cè)試孔加入100μL終止液。
11、450nm 下讀取每個(gè)孔的吸光度值（OD）。
結(jié)果分析
1．半定量結(jié)果的判定，可根據(jù)樣品的吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值來(lái)判定，樣品的吸光度值低于某個(gè)標(biāo)準(zhǔn)
的吸光度值，則說(shuō)明樣品的氟喹諾酮含量大于此標(biāo)準(zhǔn)的濃度，樣品的吸光度值高于某個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度
值，則說(shuō)明樣品的氟喹諾酮含量小于此標(biāo)準(zhǔn)的濃度。
2．定量結(jié)果判定，需要以標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)濃度的對(duì)數(shù)為Y軸繪制曲線圖，將標(biāo)準(zhǔn)濃度吸光
度值的點(diǎn)用直線連接，樣品的吸光度值也位于這條直線上，根據(jù)樣品的吸光度值在Y軸上即可找到相
應(yīng)樣品的濃度，如果樣品的吸光度值大于zui小標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值或小于zui大標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值，即可說(shuō)明
此樣品中氟喹諾酮的含量小于0.2ppb 或大于16ppb。
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