雙鏈RNA結(jié)合蛋白Staufen2抗體的生wu素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn):
1. 如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對 0.1mol/L碳suan氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;
2.所用的NHSB及待生wu素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個不同的分子比來篩選最適條件;
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點(diǎn)可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活;
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生wu素化不足,此時(shí)可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;
5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)時(shí),或位于酶的催化位點(diǎn)時(shí),生wu素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;
6.生wu素還可能與不同的功能基團(tuán),如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及ben酚基,也可與糖基共價(jià)結(jié)合;
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生wu素會對生wu素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用;
8.在細(xì)胞的熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細(xì)胞可導(dǎo)致高本底。
小鼠細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4 (mouse CTLA-4)
小鼠細(xì)胞色素P450(mouse Cytochrome P450)
小鼠C反應(yīng)蛋白(mouse CRP)
小鼠CXC趨化因子受體3(mouse CXCR3)
小鼠CXC趨化因子配體16(mouse CXCL16)
小鼠CXCL1/KC(mouse KC)
小鼠環(huán)磷酸鳥苷(mouse cGMP)
小鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(mouse CNTF)
小鼠可溶性CD36分子(mouse sCD36)
小鼠sCD40配體(mouse sCD40 Ligand)
小鼠CD34(mouse CD34)
小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原40配體(mouse sCD40L)
小鼠補(bǔ)體C3a(mouse C3a)
小鼠補(bǔ)體C5a(mouse C5a)
小鼠血清總補(bǔ)體(mouse CH50)
小鼠肌酸激酶(mouse CK)
小鼠肌酸激酶同工酶(mouse CK-MB)
小鼠羥甲基賴氨酸(mouse CML)
小鼠C-肽(mouse C-peptide)
小鼠心肌鈣蛋白T
小鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(mouse G-CSF)
