研生試劑-人白三烯C4 ELISA試劑盒的組成
一、人白三烯C4 ELISA試劑盒試 劑 組 成
1、精密度微孔板Microtest Plates 96 wells 2、酶標(biāo)偶合液Enzyme Conjugate 12.0ml
3、標(biāo)準(zhǔn)品Standard 5 x 1.0ml 4、呈色劑A、Substrate A 6.0ml
5、呈色劑B、Substrate B 6.0ml 6、終止液Stop Solution 6.0ml
7、濃縮洗滌液（1：20）Rinsing Buffer 60.0ml 8、5倍樣品稀釋液 dilution 15.0m
二、注 意 事 項(xiàng)
人白三烯C4 ELISA試劑盒為體外檢測試劑，效期內(nèi)使用，試劑應(yīng)視為傳染物，不同總批號的試劑不能混用。
使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出，室溫放置至少30分鐘。
保存于2-8℃，請勿冷凍，有效期請見盒內(nèi)標(biāo)示。
濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后，請于37℃孵育15分鐘
三、操 作 步 驟
每孔分別加入已稀釋的樣品、標(biāo)準(zhǔn)品各100ul。
將板置于37℃溫育30分鐘。
甩盡板中液體，用應(yīng)用洗滌液進(jìn)行洗滌，每次停留30秒，在紙上拍干。重復(fù)操作5次。
每孔加入酶標(biāo)偶合液100ul。
將板置于37℃溫育30分鐘。
甩盡板中液體，用應(yīng)用洗滌液進(jìn)行洗滌，每次停留30秒，在紙上拍干。重復(fù)操作5次。
每孔加底物A、底物B各50 ul，置37℃恒溫箱反應(yīng)15分鐘。
8．每孔加終止液50ul，于450nm波長讀O.D.值。
四、結(jié) 果 判 斷
儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值。
檢測值范圍：0 – 400pmol/L
人白三烯C4 ELISA試劑盒敏感度： 1.0 pmol/L
自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。
局限
6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
人肥大細(xì)胞類胰蛋白酶(MCT) ELISA試劑盒結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的MCT標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的MCT含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
3、檢測值范圍：0-4.0ng/ml
4、敏感度： 0.01 ng/ml
