玻璃珠法柱式真菌DNAout
產(chǎn)品及特點(diǎn) 真菌DNA提取是一個(gè)難題，一是因?yàn)檎婢芯z體、孢子等多種*不同的結(jié)構(gòu)形態(tài)，二是因?yàn)槠浼?xì)胞壁一般都很厚，比較難以破碎。本產(chǎn)品是液氮研磨法柱式真菌DNAout的姊妹產(chǎn)品，它利用玻璃珠法破碎細(xì)胞，主要用于從真菌孢子和液體培養(yǎng)的真菌細(xì)胞中提取DNA（液氮研磨法柱式真菌DNAout采用液氮研磨法破碎細(xì)胞，適用于從真菌菌絲體中提取其基因組DNA）。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，提供包括玻璃珠、離心吸附柱在內(nèi)的所有試劑和耗材。
2. 采用玻璃珠法破碎細(xì)胞，屬于物理方法，遠(yuǎn)比基于蝸牛酶或破壁酶的溫和化學(xué)破壁法重復(fù)性好，也不容易帶入外援真菌DNA（注：文獻(xiàn)報(bào)道蝸牛酶或破壁酶中常常有外源真菌DNA污染，用于提取真菌DNA往往會(huì)造成污染。這些文獻(xiàn)可從本公司本產(chǎn)品介紹網(wǎng)頁(yè)下方下載）。
3. 本方法提取一個(gè)樣品只需要10余分鐘，方便、快速和。
4. 一次可以處理5 mL的過夜真菌培養(yǎng)物，所得的基因組DNA OD260/OD280一般都在1.8左右，長(zhǎng)度一般在20 kb左右，每mL菌液的DNA產(chǎn)率一般在1-3ug?？梢灾苯佑糜赑CR和酶切等后續(xù)試驗(yàn)。
規(guī)格及成分 成 分 50 次包裝
酸洗玻 璃 珠，400 um 25 g
溶液A 25 mL
溶液B 25 mL
溶液C 75 mL
離心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
DNA洗脫液 10 mL
使用手冊(cè) 1份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸及保存，保存期為一年。
自備試劑 無
使用方法 1. 對(duì)菌液：取3-5 mL過夜培養(yǎng)的真菌菌液 （OD600一般在1以上）到干凈的塑料離心管中，12000 rpm離心2分鐘棄上清留沉淀。
2. 對(duì)菌落：用接種針在在培養(yǎng)基上刮取盡可能多的真菌菌落，轉(zhuǎn)移到裝有1mL水的干凈的塑料離心管中，洗滌下接種環(huán)上的菌體。12000 rpm離心2分鐘棄上清留沉淀。
3. 對(duì)孢子材料，一般取0.1g左右，直接加入到離心管中，然后進(jìn)入下一步操作。
4. 在材料中加入無菌水1mL，振蕩半分鐘后12000rpm離心2分鐘棄上清留沉淀。
5. 沉淀中加入500 uL溶液A和0.5克的玻璃珠，渦旋震蕩10分鐘。
6. 加入500uL的溶液B，渦旋震蕩，12000rpm離心2分鐘，將上清液全部轉(zhuǎn)移到一個(gè)5mL的干凈的塑料離心管中?；蛘呙抗?.3mL，分別轉(zhuǎn)移到2-3個(gè)1.5mL的干凈的塑料離心管中。
7. 在上清中加入3倍體積的溶液C，顛倒數(shù)次混勻后，分三次上離心吸附柱，每次上柱后均先室溫放置2分鐘，然后12000rpm離心1分鐘，倒掉穿透液，再第二次上柱，重復(fù)上面的操作，直到掛柱步驟完成。
8. 在離心吸附柱中加入500 uL通用洗柱液，12000rpm離心1分鐘，倒掉穿透液。
9. 重復(fù)上步操作一次。
10. 12000rpm空柱離心1分鐘。
11. 加入50-100 uL DNA洗脫液，室溫放置1分鐘以上，12000rpm離心1分鐘，穿透液即為真菌DNA樣品。
12. 為了得到更多的DNA樣品，可以重復(fù)上步操作1-2次。
13. 所得DNA即可立即使用或放冰箱長(zhǎng)期保存。
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